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如何提高果蝇实验室中的流程效率?
发布日期:2017-03-21  查看次数: 54 次  
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  100 多年以来,黑腹果蝇一直是基因研究的模式生物,具有易于培养、繁殖快、使用经济等优点,直到今天,它们仍广泛用于遗传学、生理学、病理学和进化领域的发育生物研究中。

果蝇实验一般包含四个步骤:

I、果蝇分选;

II、荧光筛选;

III、解剖;

IV、记录(成像);

  小编今天就挨个和你唠唠~~


I、果蝇分选

  果蝇分选指的是通过解剖特性和表现型对果蝇进行日常分选。果蝇经CO2麻醉后,放置在CO2灌流垫上进行分选。此步骤通常需要借助体视镜完成,为了更有利于科学研究,徕卡显微系统为大家提供多款体视镜产品,特别是Leica M50M60M80 CMO (通用主物镜)体视镜。

(照片来源:奥地利维也纳大学,神经生物学系,T. Hummel)

  典型的果蝇实验室,使用带入射光 (电光源照明) Leica M60 M80 体视镜进行果蝇分选。

  果蝇分选工作站,使用带有鹅颈点光源照明的 Leica M80 体视镜、用于麻醉小瓶内果蝇的 CO2 (1)、使果蝇在分选期间保持麻醉的CO2 果蝇垫 (2)、捆束管子的橡胶带和可以贴在管子上的粘性标贴。

Leica M60和M80

II、荧光筛选

  许多实验室使用了具有荧光蛋白标记的特殊品系果蝇,如绿色 (GFP)、红色 (RFP)、青色 (CFP) 和黄色(YFP) 等。通常,果蝇幼虫或胚胎使用荧光体视镜进行观察和分析,然后根据荧光标记是否存在于预期器官中进行选择。使用荧光蛋白标记使突变幼虫和非突变幼虫的分选变得更加简单。然而,为了收集足够多的分析数据,必须筛选和分析许多果蝇幼虫。


  在此操作步骤中,Leica Microsystems 可为大家提供的荧光体视镜包括LeicaM165 FCM205 FA MZ10 F等,它们都可用于果蝇荧光筛选。


Leica M205FA

III、解剖

  对果蝇及其幼虫进行解剖,以便详细研究器官和组织。通常,解剖时使用高性能体视显微镜。要解剖果蝇和幼虫,通常使用 Leica M80 体视显微镜便已足够,但 M125 的放大倍率和分辨率更高,还有良好的视场,对于制备果蝇器官(例如大脑) 更为方便实用。解剖之后,常常需要使用高分辨率共聚焦、复式或体视显微镜对器官进行后期成像。



IV、记录(成像)

  果蝇眼、腿、身体和翅膀的突变表型特性通常使用编码体视镜记录,这种显微镜通常都是高性能系统,例如Leica M205 FAM165 FCM205 AM205 C M165 C(“F”表示荧光,“A”表示电动,“C”表示编码,数字代表变倍比,例如205表示20.5x变倍)。

  Leica M205 FA 是一款全自动荧光体视镜,让复杂的成像工作变得轻松简单。编码和自动化操作可实现细胞和亚细胞层面的可靠测量,使用高分辨率和大景深结合的FusionOptics 技术并提供配套人体工学配件等等。

Leica M205FA

  当拍摄视频,观察果蝇行为时,可使用 Leica DMS1000 DMS300 等数字式宏观镜,只要简单设置即可摄取高帧频和大概览视图。此外,Leica Application Suite X (LAS X) 软件可提供扩展景深(EDOF 或图像Z轴堆叠等功能,快速生成日常果蝇特性测定的 3D 视图。将编码 Leica体视镜和 LAS X 软件组合使用,可正确校准所有图像,进而确保精确测量翅膀尺寸、腿长、眼表面以及其它表现型相关变化。


DMS1000

  当需要在亚细胞层面对果蝇表型进行特性测定时,通常使用共聚焦或复式显微镜(如Leica TCS SP8 SPE (共聚焦) DM6 (复式))来记录解剖的果蝇器官部位的图像。

总结

  果蝇 (通常为黑腹果蝇) 常规工作流程涉及多个使用体视显微镜的步骤:果蝇分选(果蝇日常基本分选)、荧光筛选(观察胚胎或幼虫)、解剖以及后期记录或成像。每个实验室的需求各不相同,因此,我们提供了各种丰富的配置和仪器来应对各种工作流程的特殊任务,甚至还可以使用一台仪器执行多个工作步骤。本次的经验推送是以多所优秀果蝇实验室的经验为基础,总结常规工作流程,希望能在实验室各个方面带来帮助。

摘至微信号:徕卡显微系统

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