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1.2.3 将Master Mix,水和细胞的混合物,Gel Beads以及Partitioning Oil加入芯片中
发布日期:2018-01-25  查看次数: 0 次  
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10x Genomics实验的具体操作流程

现在,我们已经准备好水、细胞和Master Mix混合物以及Partitioning Oil

  其中,Gel Geads需要室温平衡至少三十分钟

  接下来准备装载芯片

首先,向芯片“1”行加入90ul的Master Mix,水和细胞的混合液

  用Rainin多通道移液器将这些成份在最短的时间内地转移到芯片上

  我们建议转移前混匀五次,不要更换枪头

然后,将90ul混合液加入芯片上

切记:正确装载通道的顺序是十分重要的

  样品和Master Mix的混合液加入到“1”行

  Gel Beads加入到“2”行

  Partitioning Oil加入到“3”行

  将移液器吸头放到通道的底部

  边加入试剂边缓慢提起移液器

切记:将样品和Master Mix混合物加入“1”行之后, Gel Beads加入 “2”行之前

  30s的时利用间隔是十分重要的

  在这段时间,我们涡旋Gel Beads,避免Gel Beads结块。

  将Gel Beads连接到漩涡仪的接头上涡旋30s

  取下Gel Beads,甩1-2次使得所有的Gel Beads都聚集在管子的底部

  向芯片上的“2”行加入40ul涡旋好的Gel Beads

  吸取Gel Beads时,用移液管吸头小心穿透铝箔

然后,吸取40ul的Gel Beads,从底部吸取Gel Beads避免气泡的产生,缓慢吸取Gel Beads,以2s的速度按压移液器柱塞

  同时以同样的速度边加入边缓慢上提移液器

  当向单细胞芯片上转移Gel Beads时

  需等移液管吸头中的所有残留液体聚集到枪头底部

  再全部打入芯片通道内,确保完全转移

  向芯片“3”行加入270ul的Partitioning Oil以完成最后的芯片装载步骤

  我们采取用多通道排枪向“3”行加入2次135ul的Partitioning Oil的方式完成全部试剂装载到芯片

切记:没有加入Partitioning Oil将会损坏机器

  我们已经将所有试剂全部装载到芯片上

  现在准备安装芯片盖垫

  芯片垫圈的安装有固定的方向性,在盖垫的左上角有一个小的切口

  正好对齐到芯片架上的三角形

  将芯片盖垫挂在芯片的左手边,再往右拉挂好芯片垫圈

  不要晃动芯片,也不要按压芯片盖垫,否则会导致试剂从孔道中溢出。

切记:要尽量减少芯片装载和运行的间隔时间

  现在芯片已经装载完毕,我们将芯片放入10x Genomics Chromium Controller仪器内。


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